大鼠低氧誘導因子1αelisa試劑盒的正確使用步驟分享

　　大鼠低氧誘導因子1αelisa試劑盒采用ELISA技術，通過雙抗體夾心法或競爭法，利用純化的抗體包被微孔板，與待測樣品中的HIF-1α特異性結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，再經(jīng)過洗滌、顯色和終止反應等步驟，通過酶標儀測定吸光度來計算樣品中HIF-1α的濃度。
 
　　為確保實驗結果的準確性，正確使用大鼠低氧誘導因子1αelisa試劑盒至關重要。以下是詳細的使用步驟：
 



 

　　一、實驗前準備
 
　　1、試劑盒檢查：確認試劑盒包含標準品、檢測抗體、酶結合物、底物、終止液、洗滌液等，并檢查是否在有效期內(nèi)。
 
　　2、樣本準備：采集大鼠組織或細胞樣本，按要求處理（如勻漿、離心）并保存于-80°C。
 
　　3、試劑平衡：將試劑盒從冰箱取出，室溫平衡30分鐘。
 
　　4、儀器準備：確保酶標儀、移液器、離心機等設備正常工作。
 
　　二、實驗步驟
 
　　1、標準品稀釋：按說明書將標準品梯度稀釋，通常設置6-8個濃度點。
 
　　2、加樣：將標準品和樣本加入酶標板孔中，每孔100μL，設置空白對照。
 
　　3、孵育：37°C孵育1-2小時，使HIF-1α與包被抗體結合。
 
　　4、洗滌：棄去孔內(nèi)液體，加入洗滌液，靜置30秒后棄去，重復3-5次。
 
　　5、加檢測抗體：每孔加入100μL生物素標記的檢測抗體，37°C孵育1小時。
 
　　6、洗滌：重復洗滌步驟。
 
　　7、加酶結合物：每孔加入100μL酶結合物，37°C孵育30分鐘。
 
　　8、洗滌：再次洗滌。
 
　　9、加底物：每孔加入100μL底物溶液，避光孵育15-30分鐘。
 
　　10、終止反應：每孔加入50μL終止液，顏色由藍變黃。
 
　　11、讀數(shù)：用酶標儀在450nm波長下測定吸光度。
 
　　三、數(shù)據(jù)分析
 
　　1、繪制標準曲線：以標準品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。
 
　　2、計算樣本濃度：根據(jù)標準曲線計算樣本中HIF-1α的濃度。
 
　　四、注意事項
 
　　1、操作規(guī)范：避免污染，使用一次性吸頭。
 
　　2、時間控制：嚴格控制孵育和洗滌時間。
 
　　3、儀器校準：確保酶標儀和移液器準確。
 
　　4、重復實驗：每個樣本至少做3次重復，確保結果可靠。